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    關于實驗中抗體的常見問題及解決方法

    更新時間:2023-06-07   點擊次數:392次

    問題

    原因

    解決方案

    邊緣效應

    組織邊緣貼附不牢,邊緣組織松脫漂浮于液體中

    APES/多聚賴氨酸處理玻片;組織切片盡量??;盡量避免選用壞死較多的組織


    試劑未充分覆蓋組織

    滴加試劑時讓試劑完整覆蓋組織

    非特異性染色體

    抗體質量問題

    使用質量有保證的抗體


    抗體孵育時間長

    減少孵育時間


    抗體濃度過高

    降低抗體濃度


    一抗為多抗

    使用單克隆抗體


    內源性過氧化物酶及biotin

    延長滅活時間


    封閉不足

    延長封閉時間


    DAB孵育時間過久或濃度過高

    按說明書配置試劑,鏡下控制反應時間


    抗體孵育后洗滌不充分

    每次孵育之后洗3*5次


    滴加試劑時干片

    及時滴加試劑


    切片在緩沖液中浸泡過久

    抗原修復之后及時封閉加一抗,不能過夜

    陰性結果

    抗體濃度及質量

    選擇有質量保證的抗體,先做預實驗摸索抗體使用濃度


    抗原修復不全

    摸索合適的抗原修復方式及修復時間


    抗原豐度

    正常陰性


    封閉時間過長

    減少封閉時間


    DAB孵育時間短

    鏡下控制顯色時間


    細胞通透不全,抗體未能進入細胞反應

    選擇合適的通透劑及其反應時間


    一抗二抗不匹配

    選擇正確來源的二抗

    脫片

    玻片未處理好

    玻片清洗干凈后用APES或多聚賴氨酸處理


    切片厚薄不均勻

    更換刀片;調整好切片機狀態


    烤片時間或溫度不夠

    60攝食度2小時


    組織自身問題

    腫瘤壞死組織及骨組織本身易脫片


    抗原修復時溫度迅速變化

    抗原修復后讓其自然冷卻


    操作時用力過猛

    有脫片嫌疑的切片不要用力甩,用吸水紙吸干殘余液體

    染色弱

    抗體濃度低,孵育時間短

    提高抗體濃度,延長反應時間


    試劑使用超過有效期

    試劑定時更新


    滴加試劑時殘余緩沖液過多使試劑稀釋

    滴加試劑前盡量減少殘余液體


    封閉過度

    減少封閉時間

    著色不均勻

    切片厚度不一致

    更換刀片;調整好切片機狀態


    試劑配制未混勻使局部濃度不一致

    試劑充分混勻后滴加


    試劑未完整覆蓋組織

    滴加試劑時讓試劑完整覆蓋組織


    脫蠟不完整

    更換脫蠟劑或延長脫蠟時間


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